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如何選擇液相色譜保護(hù)柱
如何選擇液相色譜柱
來自于色譜系統(tǒng)的污染主要指，HPLC儀器系統(tǒng)中部件磨損而產(chǎn)生的固體顆粒，以及流動(dòng)相系統(tǒng)過濾不*殘留的固體顆粒。來自于樣品的污染主要指未*溶解的樣品或者已*溶解的樣品進(jìn)入色譜系統(tǒng)中，由于樣品溶劑和流動(dòng)相溶劑對(duì)樣品溶解存在的溶解度差異，導(dǎo)致沉淀析出污染系統(tǒng)。
特別是對(duì)于中藥 、天然產(chǎn)物、合成中間體及生物藥品的檢測(cè)，因基質(zhì)的復(fù)雜性，色譜柱受污染的情況會(huì)加嚴(yán)重。污染會(huì)導(dǎo)致色譜系統(tǒng)壓力升高、色譜柱塌陷、填料變色等，從而帶來檢測(cè)成本高，測(cè)試結(jié)果不準(zhǔn)確等各種影響。
以下幾種情況見意使用保護(hù)柱：
1、中藥、天然產(chǎn)物及合成中間體等基質(zhì)較復(fù)雜的樣品分析--因溶解性差異導(dǎo)致樣品析出而污染分析柱的情況比較嚴(yán)重，梯度洗脫時(shí)影響大。
2、生物樣品分析--因樣品的不可逆吸附導(dǎo)致的污染，保護(hù)柱可先于分析柱承受這種污染，從而延長(zhǎng)分析柱壽命。
保護(hù)柱很重要，但選擇合適的保護(hù)柱重要，選擇或使用不當(dāng)也可能帶來截然相反的效果。
保護(hù)柱分類及選擇
從材質(zhì)上分：不銹鋼材質(zhì)和PEEK(聚醚醚酮)材質(zhì),PEEK材質(zhì)優(yōu)缺點(diǎn)--樣品對(duì)金屬離子比較敏感時(shí)，選擇PEEK材質(zhì)比較合適，比如某些蛋白分板會(huì)用到PEEK材質(zhì)的分析柱，主要就是考慮到這方面的因素；不銹鋼材質(zhì)優(yōu)缺點(diǎn)--大部分小分子化合物的分析，選擇不銹鋼材質(zhì)保護(hù)柱居多，特別是當(dāng)流動(dòng)相體系使用到四氫呋喃（THF）或DMSO等一些溶解性較強(qiáng)的溶劑時(shí)，必須選擇不銹鋼材質(zhì)，甚至對(duì)于HPLC系統(tǒng)的管路也需要替換成不銹鋼材質(zhì)，因THF對(duì)于PEEK管路有相當(dāng)強(qiáng)的腐蝕作用。
從結(jié)構(gòu)上分：卡套式（柱芯+柱套）和直接填裝短柱
直接填裝短柱公優(yōu)缺點(diǎn)--這種結(jié)構(gòu)的保護(hù)柱實(shí)質(zhì)就是短柱優(yōu)缺點(diǎn)--這種的保護(hù)柱實(shí)質(zhì)就是短的色譜柱，一般填裝的填料跟分析柱填料*一樣，生物樣品分析中，用這種類型保護(hù)柱居多，除可過濾一些不溶顆粒外，還可除去一些在分析柱上易吸附的雜質(zhì)。缺點(diǎn)是，一次性使用，污染嚴(yán)重時(shí)，只能報(bào)廢。
卡套式保護(hù)柱優(yōu)缺點(diǎn)--卡套式保護(hù)柱的柱套可反復(fù)使用，柱芯污染后可替換，廠家會(huì)提倡配套瓣保護(hù)柱芯，但購(gòu)買時(shí)需要注意，柱芯中有與分析柱匹配的填料，需要確認(rèn)柱芯中的填料類型再購(gòu)買。同時(shí)，柱芯與柱套需是來源一同一廠家的同一規(guī)格否則，會(huì)存在匹配上的差異，導(dǎo)致峰型異常或者漏液。
從連接方式上分：獨(dú)立式和直連式
獨(dú)立式保護(hù)柱優(yōu)缺點(diǎn)
保護(hù)柱和分析柱這間用一段管路連接，不用擔(dān)心與分析柱在連接上的匹配問題。但使用管路連接時(shí)，連接不當(dāng)容易產(chǎn)生死體積。
直連式保護(hù)柱優(yōu)缺點(diǎn)--保護(hù)柱接口帶螺紋，可直接與分析柱連接，死體積小，UPLC分析時(shí)建議選擇直連式保護(hù)柱子缺點(diǎn)：購(gòu)買時(shí)需保證接口與分析柱匹配。
保護(hù)柱選擇考慮以下幾方面因素：
1：除非特殊情況，一般選擇填料基質(zhì)與分析柱基質(zhì)*相同的保護(hù)柱。
2、選擇保護(hù)柱尺寸可按柱體積計(jì)算，保護(hù)柱體積按分析柱體積的5%-10%即可；如4.6*250mm的分析柱體積約為4ml，保護(hù)柱體積可選擇在0.2-0.4ml之間為宜。同時(shí)，保護(hù)柱內(nèi)徑應(yīng)與分析柱內(nèi)徑相同或相當(dāng)。
保護(hù)住使用注意事項(xiàng)：
1、獨(dú)立式保護(hù)柱與分析柱連接時(shí)，連接管路盡可能短，且接口切面平常，盡量減少死體積以降低柱外展寬效應(yīng)。
2、卡套式保護(hù)柱一般未標(biāo)注液流方向，使用時(shí)自行標(biāo)注，并按照標(biāo)注方向來使用，以免正反向使用后，截留的雜質(zhì)污染分析柱。
3、直接填裝的短柱型保護(hù)柱，出現(xiàn)柱壓升高或峰型變差時(shí)，可不接分析柱進(jìn)行反向清洗，清洗溶劑可參考分析柱清洗溶劑。
4、卡套式保護(hù)柱，柱芯替換時(shí)，注意柱芯與柱套是否存在方向上的匹配，同時(shí)不易旋擰過緊，以防滑絲。
5、保護(hù)柱或柱芯一般不建議超聲清洗，因可能對(duì)填料表面修飾有影響。
6、如同一保護(hù)柱配不同的分析柱使用，每次使用前，保護(hù)柱需先清洗并用流動(dòng)相平衡保護(hù)柱一段時(shí)間后，再接分析柱使用。
保護(hù)柱與柱前過濾器的區(qū)別和使用：
使用保護(hù)柱的目的在于延長(zhǎng)分析柱的使用壽命，當(dāng)分析柱造價(jià)昂貴時(shí)，保護(hù)柱的價(jià)值尤其能體現(xiàn)，某些情況下，當(dāng)使用的分析柱本身價(jià)格便宜，保護(hù)柱并非必選，推薦使用柱前過濾器合適。
柱前過濾器與保護(hù)柱兩者外形相似，差異主要在于：保護(hù)柱內(nèi)芯裝有填料，而柱前過濾器內(nèi)芯是可換的濾片（一般為帶也的不銹鋼燒結(jié)板）
因此，從結(jié)構(gòu)可以推測(cè)使用上的差異：柱前過濾器--通用性強(qiáng)，任何分析柱前都有可使用，因其濾芯只起到過濾和截留雜質(zhì)的作用。濾片污染后可超聲清洗，反復(fù)使用。
保護(hù)柱--柱中填料除了截留雜質(zhì)的作用外，也可除去樣品中易吸附的雜質(zhì)，這一點(diǎn)對(duì)生物樣品分析尤其重要。
